เครื่องเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม เป็นเครื่องมือวิทยาศาสตร์ที่มีในห้องปฏิบัติการที่ทำงานเกี่ยวข้องกับ DNA โดยเป็นเครื่องมือที่ใช้ประกอบกับเทคนิค PCR ในการเพิ่มปริมาณ DNA ขึ้นในหลอดทดลอง การรู้ถึงหลักการของเครื่องมือ วิธีการใช้งานอย่างถูกต้อง จะทำให้ผลการทดลองหรืองานวิจัยนั้นมีความน่าเชื่อถือ Show เครื่องเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม เป็นเครื่องมือวิทยาศาสตร์ที่มีในห้องปฏิบัติการที่ทำงานเกี่ยวข้องกับ DNA ลักษณะของเครื่องเหมือนหม้อหุงข้าว เมื่อเปิดฝาออกภายในมีหลุมสำหรับใส่ตัวอย่าง ขนาด 0.2 ml จำนวน 48-96 หลุม (ตามคุณสมบัติของแต่ละเครื่อง) เครื่องนี้มีความสามารถในการปรับเปลี่ยนอุณหภูมิร้อนและเย็น และในแต่ละช่วงอุณหภูมินั้นสามารถตั้งเวลาได้ การทำงานจะเปลี่ยนอุณหภูมิ ระยะเวลา ตามโปรแกรมที่ตั้งไว้ หมุนเวียนกันไปนับเป็นจำนวนรอบ โดยในช่วงอุณหภูมิและระยะเวลาที่แตกต่างกันจะส่งผลต่อตัวอย่าง DNA ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงขึ้นในหลายลักษณะ เทคนิคที่ใช้ในการเพิ่มปริมาณ DNA ขึ้นในหลอดทดลอง เรียกว่าเทคนิคพีซีอาร์ หรือ polymerase chain reaction เทคนิคนี้จะเพิ่มปริมาณ DNA ขึ้นโดยอาศัยหลักการการจำลองตัวเอง ในธรรมชาติ DNA จะอยู่เป็นสายคู่บิดเกลียววนขวา ประกอบด้วยเบส A T C และ G การเพิ่มปริมาณ DNA ในหลอดทดลองจะมี 3 ขั้นตอนคือ 1) Denaturation เป็นการแยกสายดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบจากสภาพที่เป็นเส้นคู่ให้เป็นเส้นเดี่ยวโดยใช้อุณหภูมิในช่วง 92-95 องศาเซลเซียส 2) Annealing เป็นขั้นตอนที่ลดอุณหภูมิลงอยู่ในช่วง 50-60 องศาเซลเซียส และใช้ไพรเมอร์ซึ่งเป็นดีเอ็นเอสายสั้น ๆ (ประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์จำนวน 17-24 เบส) ที่มีลำดับเบสเป็นเข้าคู่กับสายดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบจับคู่กัน 3) Extension เป็นขั้นตอนการสร้างดีเอ็นเอสายใหม่โดยสังเคราะห์ต่อจากส่วนปลายของไพรเมอร์ (ที่ใส่เข้าไปในขั้นที่สอง) ตามข้อมูลบนดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบแต่ละสายโดยอาศัยการทำงานของเอ็นไซม์ดีเอ็นเอโพลิเมอร์เรส (DNA polymerase) ซึ่งเอนไซม์นี้ทำงานได้ดีที่สุดที่อุณหภูมิ 72-75 องศาเซลเซียส การทำ PCR ขั้นตอนที่ 1 ถึง 3 นับเป็นจำนวน 1 รอบ ให้ผลผลิตเป็นดีเอ็นเอสายคู่ที่มีลำดับเบสเป็นคู่สมกับดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบ เพิ่มขึ้นเป็นสองเท่า และเมื่อทำ PCR ขั้นตอนที่ 1 ถึง 3 หมุนเวียนไปอีกหลาย ๆ รอบ ปริมาณดีเอ็นเอจะเพิ่มขึ้นได้หลายเท่าทวีคูณ กล่าวคือปริมาณ DNA จะเพิ่มตามจำนวนรอบในการทำ PCR โดยปริมาณ DNA จะเท่า 2n เมื่อ n เท่ากับจำนวนรอบ เทคนิค PCR นี้สามารนำไปใช้ประโยชน์ในการวิจัยด้านต่างๆ เช่นทางการแพทย์ ใช้ในการวินิจฉัยโรคต่าง ๆ ทั้งโรคติดเชื้อและโรคจากพันธุกรรม ได้แก่ การตรวจหาเชื้อไวรัสหรือแบคทีเรียที่เป็นสาเหตุของโรค ทำให้การวินิจฉัยโรคเพื่อป้องกันและรักษาเป็นไปอย่างมีประสิทธิภาพมากยิ่งขึ้น ทางการเกษตร มีประโยชน์ต่อการตรวจวินิจฉัยโรคพืช การตรวจสอบสายพันธุ์พืช นอกจากนี้แล้วเทคนิคพีซีอาร์ ยังช่วยให้เข้าใจพันธุกรรมของเชื้อโรคพืช ตลอดจนการนำไปใช้ในการป้องกันกำจัดโรคพืชที่เกิดจากเชื้อรา แบคทีเรีย และไวรัส หรือเชื้อสาเหตุโรคอื่น ๆ PCR Tube ใช้ในการกระบวนการเพิ่มสารพันธุกรรมด้วยวิธี Polymerase chain reaction หรือ PCR ซึ่งเทคนิคทางชีวโมเลกุล ที่ถูกใช้นิยมแพร่หลายทั้งใช้ในด้านการศึกษาและงานในด้านวิเคราะห์ ถูกนำไปประยุกต์ใช้ทางการแพทย์และการเกษตรสามารถใช้ในการวินิจฉัยโรคต่าง ๆ ทั้งโรคติดเชื้อและโรคจากพันธุกรรม ศึกษาความผันแปรหรือกลายพันธุ์ของพันธุกรรมหรือยีน หนึ่งในเทคนิคที่นิยมของ PCR คือ Real-time PCR หรือ quantitative PCR (qPCR) เป็นเทคนิคที่ใช้ในการเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอที่ต้องการศึกษาอย่างจำเพาะและสามารถติดตามวัดปริมาณการเพิ่มจำนวนของดีเอ็นเอเป้าหมายได้ในทุก ๆ รอบของการเพิ่มจำนวนในขณะที่ปฏิกิริยากำลังดำเนินอยู่ ตั้งแต่เริ่มต้นจนกระทั่งสิ้นสุดปฏิกิริยา (real-time detection) เทคนิคนี้ทำได้โดยอาศัยการตรวจวัดสัญญาณสารเรืองแสงที่ถูกปล่อยออกมา ปริมาณแสงที่วัดได้จะเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้นจากปฏิกิริยาในแต่ละรอบ ซึ่งทำให้สามารถคำนวณกลับหาปริมาณสารพันธุกรรมตั้งต้นได้อย่างแม่นยำ นิยมใช้ในการตรวจโรค Corning Thermowell GOLD PCR Tube
Corning PCR Tube มีหลายสีด้วยกัน เพื่อใช้เป็น Colour Indicating ทำให้เป็นที่สังเกตุได้ง่าย หากมีการทำปฏิกิริยาหลายปฏิกิริยาจากผู้ใช้งาน ช่วยให้สามรถจดจำได้ง่ายมากขึ้น เช่นสีหนึ่งเป็นกลุ่มปฏิกิริยาของสารพันธุกรรมกลุ่มที่หนึ่ง และอีกสีหนึ่งเป็นกลุ่มปฏิกิริยาของสารพันธุกรรมกลุ่มที่สอง เป็นต้น �Ԥ PCR 㹡�������ӹǹ DNA ����ԹԨ����ä�ҧ��Դ���������ѧ�������ѹ������ ������� ���� Deoxyribonucleic (DNA) ������ѹ��������˹������Ǻ�����������ʹ�ѡɳ���ҧ� �ͧ��������Ե �������������Сͺ����˹�����������ҹ������¡��� ���Ǥ����䷴�� �ѹ���ش�ͧ���š����� ������ྐྵ�� �����������������ѵ�����ҧ���� ��ʔ 1 ��� ������������� 4 ��Դ��� adenine (A) , guanine (G) , cytosine (C) , thymine (T)�ѡɳ��ç���ҧ�ͧ���������Сͺ����ҡ����ش��Ǥ����䷴� 2 ���������ѹ��������ѹ���ѡɳ��������������ѹ����¹ ������������§�������������������� ���������˹������ִ�Ѻ�����ҧ�������ͧ ��л�ҡ���������ǹ������� A ���Ѻ������ҧ�ѹ�СѺ�� T �����ǹ������� G ���Ѻ����� C �������Ѻ����ѹ������¡������������ (�ѧ�ʴ���Ҿ��� 1) ���������ǹ����������������ͧ�������������ͧ ��չ� (gene) �������ǹ�����è�����������Ѻ������ҧ�õչ��Դ���Դ˹�� ���չ�����ҧ�ѹ���������˹�����������������§���Ѻ�ͧ��������ѹᵡ��ҧ�ѹ���������� ����ö�������������ѹ�������� ������ ��� DNA ������������ѹ�������ͧ��������Ե ������Ҵ���ᵡ��ҧ�ѹ�ҡ��ó��ͧ����������Ҩ�ը��� (genome) �����������ѹ�������������� DNA ���� RNA ������ ����Ҩ������������������������������� (linear) ǧ��ǹ (circular) ����������¡�ѹ (segments) �����ҧ�ҡ�����ͧẤ�����������������Ե����٧ ��������õչ�����Ѻ�ѹ����Ѻ��� DNA ������ٻ��ҧ������Ѵ ������¡��������� (chromosome) (�Ҿ��� 2) ����Ấ������ ���������� ��Сͺ���� DNA �������������Դǧ��ǹ�Ѻ�������Ѻ�õչ������Դ ����������¡�����Ǥ����´� (nucleoid) ������������������������������������������Ե����٧ ��� DNA ��������ѡɳ�����Ѻ����Ѻ��� (histone) ����õչ��Դ���� ��������ѹ���˴����ͧ��� DNA �����������ö��è�������ǹ���������ͧ������ �͡�ҡ������������ ���������Ե����٧�ѧ���չ����������ǹ�ͧ organelle ���� ����ת�����չ������������� (mitochondria) �������þ��� (chloroplast) �ա��ǹ˹�������Ԥ Polymerase Chain Reaction (PCR) Polymerase Chain Reaction ���� (PCR) ���Ԥ����Ѻ��������ҳ����������������ѡ��� DNA Replication ���������ѧ����������� ��� �� ������� �ҡ ���������Ẻ���ʹ���ͧ�������������ѹ�����������������������Դ�������ҹ��� �Ԥ����Ѳ������������ �.�. 2528 �� Kary Mullis ��������������ѷ Cetus Corporation �ش���ͧ�Ԥ PCR ��� ����ö��������ҳ������� �����ҧ���������������������ҹ����������������� ���֧�Ѩ�غѹ����Ԥ PCR ���Ѻ�����Ѻ��ا����Ѳ������� � ��ҹ����з�����Ѻ�������Ѻ��������������Ӥѭ�ҡ����ҹ��ҹͳ�������š�� ����ö���������ª������駡Ѻ�ҹ�Ԩ���ҧ������š������ѹ�����ǡ��� �� �����������ҳ�չ (gene cloning) ��������������Ѻ���ͧ�չ (gene sequencing) ������ҧ �� ��� �� �Դ��� (DNA probe) �������Ԩ������ء�� �� ����֡������ʴ��͡�ͧ�չ�ҡ mRNA ������ҧ�չ�����ѹ��� (in vitro mutagenesis) �����������˹������ѹ������չ (point mutations and deletions) �����Ԥ PCR 㹡�������ӹǹ DNA�Ҿ��� 1 ͧ���Сͺ����ç���ҧ�ͧ DNA ��èѺ���ѹ�ͧ�ʤ�����ͧ��� DNA �ͧ��·�������ѡɳ�����Ǥ�� ��Ѻ��ȷҧ (����� : Alberts ��Ф��, 1983) �Ҿ��� 2 ��� DNA ����Ǥ��ѹ�Ѻ�õչ���˴�����������ҵչ������������������������ (����� : Freifelder, 1985) ��ѡ��âͧ PCR ����ѡ�������ҹ�����ѧ������������� ��������ҡ���������� �������Ẻ˹������������� DNA poloymerase ������ѹ��������������Դ��ҡ������� �������֡�������������Ѻ�� �� PCR ����ö�ѧ��������������������� 2 ���������ѹ ����������� (primer) 1 ��� ��ԡ����� PCR �� 3 ���� �����ع���¹ ������ͧ�ѹ� ���������������������ͧ������������á ���¡��� denaturing ������¡����� ��� �� �������Ẻ�ҡ��Ҿ����������� ������������������س������٧ 92-95o��������ͧ���¡��� annealing ���������Ŵ�س�����ŧ����Ѵ���������� ������� ��� �� ������ � (��Сͺ������Ǥ����䷴�ӹǹ 14-13 ��) ��������Ѻ ����������Ѻ�� ��� �� �������Ẻ�Ѻ����ѹ ����������س��������ǧ 37-60o ������� 3 ���¡��� extension ����������ѧ�������� ��� �� ����������ѧ����������ҡ��ǹ���� 5 �ͧ������� ������������������ �������Ẻ��������������������ҹ�ͧ����������������������� (DNA polymerase) ���������������ö���ҹ��������ش����س����� 72-75o � �������������������������������� �س���ѵ������������������ͧ��ԡ����� ��ʹ�����������Ҿ��� 3 ��ѡ���������������������ҳ������� �����Ԥ PCR(����� : PE applied Biosystems)�ҡ������� 1-3 ����Ѻ���ӹǹ 1 �ͺ (one cycle) ���������Ե�����������������������Ѻ����������Ѻ��������������Ẻ����������ͧ��� ������Ѵ����Դ��ԡ������١���ҡ������ 1 �֧ 3 ��ع���¹��ա���� � �ͺ����������ҳ��������� �ҡ��� ����ҳ�����ԡ����� 20 �ͺ ����ö��������ҳ����������������������� 100,000 ��� ����������������ͧ���ԡ����� PCR
����ͧ��������ҳ������� (PCR machine) ����ͧ Thermal cycler ���� PCR machine ������ͧ������������� PCR �������ͧ�������������Ẻ��������к���鹡Ѻ����͡Ẻ�������Դ���ͧ����ѷ �����Ե ����Ӥѭ�����ͧ����ö��Ѻ����¹�س�������������������������������ҹ��ع���¹�ѹ���� � �ͺ����������������ҹ������������¹�ŧ�س����� �����������������������ҹ�ѡ����������������������� denaturing annealing ��� extension �������ǧ 15 �Թҷ� �֧ 10 �ҷ� �ѧ��������������ҳ����������Ը� PCR 25-40 �ͺ ������������ҳ 1.5-5 ����������������������Ե��������ҡ��ԡ����� PCR �����������Դ�ҡ��ԡ����� PCR ���ʹ��ͧ���������ö�ͧ��������������� �ѧ���������Ǩ�������������Ե����ͧ��������ҧ����� PCR ���¡��������������Ԥ������¡��� agarose gel electrophoresis ���������¡��������������������������� (Agarose gel) �������ҧ��������������ö�������������������Ѻ��Ҵ�ͧ������������������������ �����������¡���Ը��������ö�ͧ������������������������� ��������ͧ�ʧ������͡Ѻ�ʧ�ص��������ŵ ��������ᶺ����������ͧ�ʧ������� (�Ҿ��� 4)�Ҿ��� 4 ᶺ�����������¡����������Ը� agarose gel electrophoresis������������� ethidium bromide �����Ҿ������ʧ ultraviolet ����ª���ͧ PCR ������Ǩ�ԹԨ����ä �Ѩ�غѹ����Ѻ����� PCR ���Ԥ�Ӥѭ�ҡ��ҹͳ�������š�� ���������ҹ����ҹ���ͧ��Ժѵ��������֧�������ء�����ҧ���ᾷ���������ɵ�����ö�������ԹԨ����ä��ҧ � ����ä�Դ��������ä�ҡ�ѹ������ �֡�������ѹ�����������ѹ����ͧ�ѹ�����������չ ��Ἱ����չ����֡�����Ѻ���ͧ�չ�ͧ��������Ե���ء��Դ ���������ͧ���ҡ�Ԥ�������ö�����ӹǹ����������ʹ��֡�����������ҳ�ҡ������ѹ�Ǵ���� ������Ԥ���������������ª���ͧ PCR �ҧ��ҹ���ᾷ�� ���� �����Ǩ�ԹԨ����ä�������Ǩ���������������Ấ��������������˵��ͧ�ä (�� �ä�ʹ��,�ѳ�ä,��������) �����Ǩ���չ�������� (�� ����������,�����������˭�) �������ª���ͧ PCR �ҧ���ᾷ�������������������ԹԨ����ä������ͧ�ѹ����ѡ��������ҧ������Է���Ҿ�ҡ�������ҧ��ҹ����ɵ� PCR �����ҷ�ҡ��ҹ��ҹ�����Ѻ��ا�ѹ����ת �����Ǩ�ͺ����ѹ����ת �����Ǩ�ԹԨ����ä����ѹ����ת��ҹ�ҹ�ä ����֡����������ѹ�������ҧ�ת�Ѻ�����ä�������֡���չ�Ѻ������ � �ͧ�ת��������ä �������ʴ��͡�ͧ�չ���������� ����Ԥ PCR ���������������֧�ѹ�������ͧ�����ä�ת��� �ת����� ��ʹ����������������ͧ�ѹ�ӨѴ�ä�ת����Դ�ҡ������ Ấ������ �������� �����������˵��ä��� ��������Ԥ PCR ���١��������ص��ˡ����������§��� ����� �ص��ˡ������͡�������������Ѻ������� 4-5 ������ҹ�ҷ����� ����Ѩ�غѹ����ɵ�����������ʺ�ѭ���ҡ�ä�кҴ��������§��� ��������������Ե������͡�������������٭����������֧���� 1-2 ������ҹ�ҷ ���˵��ͧ�ä�кҴ��������� ��ǹ�˭��Դ�ҡ��������������ͧ���Ԥ PCR ������Ǩ�ͺ ���������ö��ͧ�ѹ�������кҴ�ͧ�ä���ѹ��ǧ�� �͡�ҡ�������Ѵ���͡����ѹ�������������������������ѹ�������������û�ǹ�ѹ�ء��� (genetic diversity ���� Variation) �٧���������ö���Թ������������Ը�����Ѵ���͡���������Է���Ҿ ����١��ͧ�֧�дѺ �ѹ��������������ͺ������ҡ ��Ƿ. PCR มีอะไรบ้างองค์ประกอบที่สำคัญในการทำ PCR ได้แก่
-เอ็นไซม์DNA Polymerase ชนิดทนความร้อน (Taq DNA polymerase) -Deoxy nucleotide triphosphate(dNTP) -บัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (PCR Buffer) -แมกนีเซียมคลอไรด์(MgCl2)
กระบวนการ PCR คืออะไรPolymerase chain reaction หรือ PCR เป็นการเพิ่มจํานวนยีนหรือชิ้นส่วน DNA ที่สนใจในหลอดทดลองแบบ ซํ้าๆ กันหลายๆ รอบ (repeated cycles) โดยอาศัยการทํางานของเอนไซม์ polymerase ที่มีคุณสมบัติทนความร้อน (thermostable DNA polymerase) โดยจํานวน DNA ที่เพิ่มขึ้นในแต่ละรอบปฏิกิริยาจะเป็นลักษณะแบบ exponential curve คํานวณได้ ...
PCR อาศัยหลักการของกระบวนการใดในสิ่งมีชีวิตเป็นพื้นฐานPolymerase Chain Reaction หรือ (PCR) เป็นเทคนิคสำหรับเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอโดยอาศัยหลักการ DNA Replication ซึ่งเป็นการสังเคราะห์สายดี เอ็น เอ สายใหม่ จาก ดีเอ็นเอต้นแบบในหลอดทดลองภายในระยะเวลาอันสั้นและได้ดีเอ็นเอสายใหม่เกิดขึ้นเป็นล้านเท่า เทคนิคนี้พัฒนาขึ้นเมื่อปี พ.ศ. 2528 โดย Kary Mullis และคณะแห่งบริษัท Cetus ...
PCR ทำเพื่ออะไรเทคนิค PCR นี้สามารนำไปใช้ประโยชน์ในการวิจัยด้านต่างๆ เช่นทางการแพทย์ ใช้ในการวินิจฉัยโรคต่าง ๆ ทั้งโรคติดเชื้อและโรคจากพันธุกรรม ได้แก่ การตรวจหาเชื้อไวรัสหรือแบคทีเรียที่เป็นสาเหตุของโรค ทำให้การวินิจฉัยโรคเพื่อป้องกันและรักษาเป็นไปอย่างมีประสิทธิภาพมากยิ่งขึ้น ทางการเกษตร มีประโยชน์ต่อการตรวจวินิจฉัยโรคพืช การตรวจ ...
|